摘 要：观察颈性心绞痛家兔模型肌组织内α－肌动蛋白变化。方法：选用大耳白兔，采用低头干预并注射瘀血，建立颈性心绞痛动物模型，运用免疫组化法观察α－肌动蛋白变化。结果：对照组可见阳性胞浆染色均一，呈淡棕黄色或深棕黄色，肌纤维平直，横纹可见。模型组大部分肌纤维呈波浪状。胞浆染色不均一，有淡染、缺染现象。结论：颈性心绞痛颈肌细胞发生了早期退变。
关键词：颈性心绞痛；α－肌动蛋白；颈肌
通过免疫组化方法，观察颈性心绞痛家兔颈肌组织内α－肌动蛋白表达及含量变化，为颈性心绞痛的发病机理寻找实验依据。现报告如下。 1 资料与方法 1.1 实验动物：健康大耳白兔40只，6月龄，体重2.0～2.5 kg，雌雄不拘，由中国药品生物制品检定所实验动物中心提供，在贵阳中医学院实验动物研究所分笼饲养，喂标准兔饲料。 1.2 实验试剂：S-P免疫组化试剂盒，Lot：50481613；Mouse actin-Alpha Sarcomeric Actin，Lot：41281201；封闭用正常羊血清Blocking Solution，Lot：50481613；二抗 Go Anti-Mo LgG/Bio，Lot：50481613；辣根酶标记链霉卵白素Streptavidin/HRP，Lot：50481613，以上均购自北京中杉金桥生物技术有限公司 1.3 实验设备：光学显微镜：Nikon O-A-S型，日本。石蜡切片机：AiHua QPJ-IC，中国。生物组织自动脱水机：AiHua TSJ-IA，中国。生物组织包埋机：AiHua BMJ-1，中国。图象分析系统：Biomias 2001图象分析系统, 四川大学图象图形研究所。 1.4 实验方法：颈性心绞痛动物模型制备[1]：40只家兔适应性饲养1周，随机分为对照组和模型组，3％戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉，取俯卧位固定，常规术野消毒，C臂X光机引导下穿刺，抵达家兔左侧第7颈椎横突，用制备好的3 ml瘀血注入，浸润模型组家兔左侧颈夹肌，横突间肌与横突棘肌。家兔苏醒后送回笼养。次日，将模型组家兔置于特制框架中以改变颈部正常应力分布，低头角度为45°，1次/d， 5 h/次，松解后送回笼养。2周后重复注射1次，低头饲养12周。对照组不做任何处理。 1.5 观察指标和方法 1.5.1 组织学观察：造模后12周取材，采用空气栓塞法处死家兔，即刻取颈胸锁乳突肌，生理盐水冲洗后放入4%多聚甲醛固定液瓶中，经脱水、脱钙、石蜡包埋、切片、HE及免疫组化染色，进行组织病理学检查。 1.5.2 显微镜观察及图像分析：显微镜的物镜固定：40×。光栅孔径：0.25。光源电压：9 mV。曝光时间：0.1 ms。色温：5 500 K。分辨率：1 600×1 200。图像采集程序：Biomias 2001。阳性视野的确定条件：正常颈肌阳性为胞浆染为棕黄色，均匀分布，显横纹。采集图像位置的选取：图像采集显微镜下，每张肌组织纵切标本以阳性染色区中心为核心向四周随机取5阳性视野，利用图像分析程序测量该阳性染色面积及染色的光密度。 1.6 统计学处理：实验结果用均数±标准差（±s）表示，采用t检验。 2 结果 2.1 颈肌α－横纹肌肌动蛋白标本光镜观察结果：对照组可见阳性胞浆染色均一，呈淡棕黄色或深棕黄色，肌纤维平直，横纹可见(图1)。模型组大部分肌纤维呈波浪状。胞浆染色不均一，有淡染、缺染现象（图2）。
2.2 颈肌α－横纹肌肌动蛋白光密度变化：对照组（0.063±0.019），模型组（0.054±0.018），两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。 3 讨论 实验观察发现，慢性炎性反应刺激使颈肌处于异常应力的非生理状态下，颈部肌群结构及功能蛋白的表达均异常，肌细胞发生了早期的退变。推测可能与肌组织长期受炎性反应刺激而痉挛缺血，神经营养状态不良，导致骨骼肌细胞内肌动蛋白持续下降有关[4]。由此肌张力等也受到一定影响。可见，在此过程中，肌组织内部肌动蛋白等结构功能蛋白的异常是肌挛缩、肌力下降及炎性反应刺激等改变的内因，且肌组织发生了早期退变。参考文献：[1] 唐东昕,杨 柱,金亚弦.应用气血理论建立颈性心绞痛动物模型的探讨[J].辽宁中医杂志,2008,35(3):364.[2] 吕江明,余家树.大鼠死后心肌骨骼肌细胞肌动蛋白变化及与死亡时间的关系[J].中国法医学杂志,2004,(19)4:213.
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