作者：田吉，李翅翔，何兵，肖顺汉
【摘要】 目的建立楤木及其提取物中齐墩果酸的含量测定方法。方法采用 高效液相色谱（hplc）法，色谱柱为kromasil c18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为甲醇-水（95∶5），检测波长210 nm，柱温30℃；流速1.0 ml·min-1；进样量10μl。结果齐墩果酸在0.502～4.016μg 范围内与峰面积具有良好的线性关系（r＝0.999 9），平均回收率96.38 %，rsd为1.17%。结论该方法灵敏、准确，可用于楤木及其提取物的质量控制。
【关键词】 楤木； 提取物； 齐墩果酸； 含量测定； 高效液相色谱法
abstract：objectiveto establish a method for the determination of oleanolic acid in root bark of aralia and its extracts．methodsa kromasil c18 column(250mm×4.6mm，5μm) with mobile phase consisting of methanol-water (95∶5) was adopted，and the detection wavelength was set at 210 nm. the column temperature was 30℃. the flow rate was 1.0 ml·min-1，and the sample volume was 10μl．resultsthe calibration curve showed good linearity over the range of 0.502～4.016μg（r＝0.999 9）.the average recovery was 96.38 % with rsd 1.17%.conclusionthe method is sensitive，accurate，and is suitable for the quality control of root bark of aralia and its extracts．
key words：root bark of aralia ； extracts； oleanolic acid； content determination； hplc 楤木，又称楤木白皮，为五加科楤木属植物楤木aralia chinensis l.的根皮，具有祛风湿，利小便，散淤血，消肿毒的功效［1］。全国各地以多种楤木属植物的根皮作楤木入药，常见的有楤木、太白楤木、辽东楤木、黄毛楤木等种。楤木属植物的主要有效成分为楤木皂苷，苷元为齐墩果酸。楤木皂苷具有适应原样作用，以及中枢神经抑制、强心、降血脂、降血糖和降血压、抗癌等多种药理作用［2，3］。但目前国家尚无楤木皂苷的法定对照品，为控制质量，本实验采用高效液相色谱法，以苷元齐墩果酸为指标，测定了楤木药材及其提取物楤木总皂苷的含量。
1 仪器与试药
1.1 仪器
戴安高效液相色谱仪（p680a四元低压梯度泵，pda-100二极管阵列检测器，tcc-100柱温箱，chromeleon色谱工作站）；瑞士precisa电子天平（xr 205sm-dr）。
1.2 试药
辽东楤木，购至安徽亳州药材市场，产地辽宁，楤木，采至四川省泸州市纳溪区龙车乡，经泸州医学院生药教研室鉴定分别为辽东楤木aralia elata (miq.)的及楤木aralia chinensis l.的根皮。楤木总皂苷，由泸州医学院药物研究所自制。齐墩果酸对照品（110781-200512），中国药品生物制品检定所提供，经hplc峰面积归一化法计算纯度在98％以上。甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为dikma kromasil c18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-水（95∶5）；检测波长为210 nm；柱温为30℃；流速为1.0 ml·min-1；进样量10 μl。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取齐墩果酸对照品5 mg，加甲醇25 ml制成0.2 mg·ml-1的对照品溶液（实际0.200 8 mg·ml-1）。
2.3 供试品溶液的制备
2.3.1 楤木药材供试品溶液的制备
精密称取药材细粉0.2 g，加入25 ml甲醇，回流提取4 h，过滤，少量甲醇洗涤，合并滤液，水浴挥去甲醇，加20 ml10%稀硫酸，水浴回流4 h，氯仿60 ml分5次萃取，合并萃取液，10 ml水洗后水浴蒸干，加甲醇溶解并定容到10 ml。
2.3.2 楤木提取物供试品溶液的制备
精密称取总皂苷0.2 g，加入20 ml 10%稀硫酸，水浴回流4 h，氯仿60 ml分5次萃取，合并萃取液，水浴蒸干，加入甲醇定容到25 ml，精密量取1 ml，用甲醇定容至10 ml。
2.4 系统适应性实验分别精密吸取上述对照品溶液、供试品溶液各10 μl，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录色谱图，结果见图1～4。在试验条件下，齐墩果酸与其相邻色谱峰的分离度大于1.5，理论塔板数以齐墩果酸峰计均大于10 000，溶剂无干扰。
2.5 线性关系考察
精密吸取齐墩果酸对照品溶液 (0.200 8 mg·ml-1) 2.5，5，7.5，10，15，20 μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积a对进样量c（μg）进行回归，回归方程为：a=8.135 4c－0.012 2，r=0.999 9。齐墩果酸在进样量0.502～4.016 μg范围内，峰面积与进样量有良好的线性关系。
2.6 精密度实验分别取“2.2”项下对照品溶液10 μl，按上述色谱条件连续进样6次，记录齐墩果酸的峰面积，rsd为0.45％。表明仪器精密度良好。
2.7 稳定性实验取“2.3.1”项下供试品溶液，于制备后0，4，8，12，24，36 h进样10 μl，记录齐墩果酸的峰面积，其rsd为1.95％，表明供试品溶液在36 h内较稳定。
2.8 重复性实验取同一批药材（批号：070801），按“2.3.1”项下方法分别制得6份供试品溶液，进样测定，记录齐墩果酸的峰面积并计算含量，rsd为1.29％。表明上述方法重复性良好。
2.9 加样回收实验精密称取已知含量（1.69％）的楤木药材（批号：070801）9份，每份0.1 g，分成3组，每组3份，分别精密添加齐墩果酸对照品储备液（0.675 mg·ml-1）2，2.5，3 ml，按照“2.3.1”项下方法制备供试品溶，按上述色谱条件测定，并计算平均加样回收率。结果见表1。表1 加样回收实验结果（略） 实验结果表明，上述方法具有良好的回收率。
2.10 样品测定 分别精密量取齐墩果酸对照品溶液和各供试品溶液10 μl，照上述色谱条件测定，并计算齐墩果酸的含量。结果见表2。表2 楤木及其提取物中齐墩果酸含量测定结果（略）
3 讨论
3.1 检测波长的确定
采用二级管阵列检测器在190～500 nm波长范围对对照品及各样品中的齐墩果酸峰进行光谱扫描，其最大吸收波长均为201 nm，但由于流动相在短波长处有末端吸收，为了减少干扰，经不同波长的色谱图比较，选择210 nm为检测波长，峰形好，干扰小。
3.2 前处理方法的选择
参考文献资料，对药材的前处理采取了先水解后氯仿萃取，以及先甲醇提取，水解后氯仿萃取两种方法，进行对比，结果前者测得的齐墩果酸含量为后者的80%，所以，最后选择了甲醇提取+水解+氯仿萃取的方法。
3.3 提取方法的选择
实验对药材的甲醇提取方法也进行了比较，考察了超声一次，超声两次，回流提取4 h，索氏提取4 h 四种方法，结果，以回流提取得到的齐墩果酸含量最高，最终选择甲醇回流4h的药材提取方法。
3.4 辽东楤木、楤木图谱比较
两种药材的齐墩果酸含量差别不大，但在hplc图谱中，楤木在齐墩果酸峰前面有明显的3个小峰，而辽东楤木仅有1个小峰，且含量极低，能否作为区别二者的依据之一，尚需加大样本量，作进一步考察。
【参考文献】 ［1］湖南省卫生厅.湖南省中药材标准［s］.长沙：湖南省科学技术出版社，1993：339. ［2］许旭东，杨峻山，朱兆仪.楤木属植物三萜皂甙研究进展［j］.药学学报，1997，32 (9)：711. ［3］王忠壮,万鲲,胡晋红.楤木属药用植物的药理活性研究［j］.中国药学杂志，2002，37（2）：86
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