雷公藤甲素对哮喘小鼠白三烯b4、c4表达的影响【关键词】 雷公藤甲素;支气管哮喘;ltb4；ltc4
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材料和方法
1.动物分组
70只清洁级雄性昆明种纯白小鼠，购自广东医学院实验动物中心。体重(20±3) g，按随机数字表法分为7组，每组10只，a组正常对照组，b组卵蛋白哮喘组，c组地塞米松10 mg/kg治疗组，d组雷公藤甲素20 μg/kg治疗组、e组雷公藤甲素40 μg/kg治疗组、f组雷公藤甲素80 μg/kg治疗组、g组雷公藤甲素160 μg/kg治疗组。 2.主要试剂
elisa试剂盒(购自北京生工公司)、卵白蛋白(购自sigma 公司)、雷公藤甲素(购自福建省医学科学研究所)。 3.建立模型［1］
对照组(a组)：第1 天、7 天、14 天给予0.5 ml生理盐水腹腔注射，第21天开始生理盐水雾化吸入，每天2次，每次1小时，连续3天。致敏组(b、c、d、e、f、g组)：第1天、7天、14天给予鸡卵白蛋白(ova)抗原液0.5 ml(含氢氧化铝2 mg和ova 15 μg)腹腔注射，第21 天开始用1％ova雾化，激发小鼠哮喘发作，每天2次，每次1小时，连续3天。 4.治疗方法
a、b组于每次激发前30分钟腹腔注射生理盐水0.5 ml，c组于每次激发前30分钟腹腔注射10 mg/kg地塞米松，d、e、f、g组于每次激发前30分钟分别腹腔注射20 μg/kg、40 μg/kg、80 μg/kg、160 μg/kg的雷公藤甲素。 5.标本获取
末次激发后12小时处死小鼠，用pbs 液行支气管肺泡灌洗，分4次灌洗，合并4次balf，回收率均＞85%，1500 rpm离心10 min，上清液于-70°c保存备测ltb4和ltc4。 6.检测方法
采用elisa方法检测balf和肺组织匀浆中ltb4、ltc4水平，严格按照说明书要求操作执行，根据标准曲线求得所测样品浓度。酶标仪450 nm读取吸光度。 7.统计学处理
计量资料用-±s表示，spss11.0统计软件用单因素方差分析中的lsd(方差齐时)和gameshowell (方差不齐时)、非参数的序变换再进行方差分析及spearman相关分析，p＜0.05差异有统计学意义。
结果
1.各组balf中ltb4和ltc4的变化情况
小鼠balf浆中ltb4水平为f=2.461，p=0.011：实验结果显示，哮喘组小鼠ltb4含量明显升高（p＜0.01）；雷公藤甲素组、地塞米松组与哮喘组相比，含量下降（p＜0.05）；其余各组(除d组外)相比，ltb4含量的差异无统计学意义（p＞0.05）。小鼠balf中ltc4水平为f=2.230，p=0.002：实验结果显示，哮喘组小鼠ltc4含量明显升高（p＜0.005）；地塞米松组、雷公腾甲素组与哮喘组相比，含量下降（p＜0.05及p＜0.01）；雷公藤甲素组(除d组外)与地塞米松组ltb4及ltc4含量的差异无统计学意义（p＞0.05）。见表1。表1 各组balf中ltb4和ltc4的变化（略）
2.各组肺组织匀浆中ltb4和ltc4的变化情况
小鼠肺组织匀浆中ltb4水平为f=3.517，p=0.016：实验结果显示，哮喘组小鼠ltb4含量明显升高（p＜0.05）；雷公藤甲素组、地塞米松组与哮喘组相比，含量下降（p＜0.05）；其余各组(除d组外)相比，ltb4含量的差异无统计学意义（p＞0.05）。小鼠肺组织匀浆中ltc4水平为f=3.214，p=0.004：实验结果显示，哮喘组小鼠ltc4含量明显升高（p＜0.01）；地塞米松组、雷公藤甲素组与哮喘组相比，含量下降（p＜0.05及p＜0.001）；雷公藤甲素组(除d组外)与地塞米松组ltc4含量的差异无统计学意义（p＞0.05）。见表2。表2 各组肺组织匀浆中ltb4和ltc4的变化（略）
讨论
雷公藤甲素是从卫矛科植物雷公藤中分离出的活性最高的环氧化二萜内酯化合物，是雷公藤的主要有效成分之一，其相关效价比雷公藤总苷高100～200倍［2］，经药理和临床试验表明其具有免疫抑制、抗炎、抗生育及抑制气道重建等生物活性［3～6］。ltb4是引起气道变应性炎症的主要介质，是目前已知最强的中性粒细胞催化因子和活化因子之一。ltb4亦介导内皮细胞和多型核白细胞表面黏附蛋白的表达，促进炎症细胞的渗出及迁移［7］。hanazawa等［8］研究发现中、重度哮喘患者较轻度哮喘患者呼出气中ltb4水平高，表明ltb4水平的增高与哮喘的恶化有关。ltc4和ltd4引起气道平滑肌收缩的能力比组织胺约强1000倍。在哮喘患者气道中常可发现厚而黏稠的黏液栓，这与黏液的产生过多及清除减慢有关，cyslts能引起黏液的高分泌，能缓和而持久地减慢气道纤毛的摆动频率。此外，lts可增大血管内皮细胞间隙，增加血管通透性，血浆外渗，从而引起黏膜水肿。本研究表明雷公藤甲素治疗哮喘的作用可能是通过抑制白三烯ltb4和ltc4的表达来实现的，一定剂量雷公藤甲素组与地塞米松组无统计学差异。雷公藤甲素无激素类副作用，考虑对激素无效或不适合应用激素的支气管哮喘有临床推广应用价值。
【参考文献】 ［1］barnes nc,pujet kast, a novel leukotriene recepter antagonist : results of the first european, placebo controlled,multicentre clinical study in asthma［j］.thorax, 1997,52(6) :523-527. ［2］岗艳云,张正行.雷公藤及其单体的药理作用研究进展［j］.中国药科大学学报，1995, 26(4):2521. ［3］郭志宏,杜永成,许建英，等.雷公藤多苷对哮喘大鼠气道转化生长因子β1 mrna 和ⅲ型胶原表达的影响［j］.中国药物与临床，2008，8(8)：379. ［4］赖克方，王长征，郭晓明，等.雷公藤甲素抑制il5介导的人嗜酸性粒细胞存活延长作用及其机制研究［j］.中国免疫学杂志，2000，16(11)：6011. ［5］李志奎，王长征，钱桂生，等.雷公藤甲素对哮喘豚鼠肺内嗜酸性粒细胞il5等受体表达的影响［j］.免疫学杂志，2002，18(2)：1021. ［6］盛青，何建猷，周爱莲，等.雷公藤甲素对哮喘小鼠信号转导和转录激活因子stat6及eotaxin 表达的影响［j］.国际呼吸杂志，2006，26（1）：12-16. ［7］henderson wr jr. the role of leukotrienes in inflammation［j］.ann intern med, 1994,121(9):684-697. ［8］hanazawa t,kharitonov sa, barnes sed nitrotyrosine in exhaled breath condensate of patients with asthma［j］.am j respir crit care med,2000,162(4 pt1):1273-1276.
作者：刘清毅作者单位：广东省粤北人民医院呼吸内科,广东韶关 512026
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