解脲支原体（urea plasma urealyticum，Uu）是介于细菌和病毒之间、目前所知的能独立生活的最小微生物。它主要通过性接触传播，可导致非淋菌性尿道炎、子宫内膜炎等疾病，严重者可致女性不孕不育症、自然流产，且高浓度Uu感染的女性患不孕症的危险比正常人群相对高出近3倍[1]。临床上常用大环内酯类及喹诺酮类抗菌药治疗Uu感染，但由于广谱抗生素的广泛应用以及不正确使用等原因，Uu的耐药现象越来越常见。近年来以单味中药或复方中药制剂治疗泌尿生殖道Uu获得较为满意的疗效，且具有副作用少的优点[2-3]。据资料记载，莪术含有姜黄素、莪术醇、异莪术醇等20多种成分，在抗病毒、抗菌和抗肿瘤方面具有较好的作用[4-5]；鱼腥草化学成分复杂，主要成分有挥发油、生物碱、黄酮、多糖和有机酸等，具有较好的抗炎活性[6-8]；土茯苓含多种化学成分，有糖类、有机酸黄酮苷类、皂苷类及挥发油成分，具解毒利湿、抗菌消炎功效[9-11]。本实验以本院就诊女性患者生殖道Uu临床菌株作为标本，旨在研究莪术、鱼腥草及土茯苓对Uu的体外抑菌作用，对本院研发治疗Uu感染的新型复方洗液作实验依据。 1 材料与方法 1.1 试剂及中药的制备 本实验采用珠海迪尔生物工程有限公司生产的DL Medical液基型支原体培养基，实验所用的莪术、鱼腥草、土茯苓生药均来自本院中药房。秤取100g生药，置烧杯中略粉碎后，加入200~300mL蒸馏水浸泡30min，用电炉煎热15～30min，过滤，留取滤液。向生药沉渣再加入适量蒸馏水以相同方法煎制，过滤，沉渣弃去，混合2份滤液。冷却至室温后以3000r/min离心15min，留取上层清液，蒸发或补充蒸馏水，将最终浓度调整为1g/mL。以50%枸橼酸钠调整pH值在5.5～6.0间。分装，置高压锅中121℃，15min灭菌。4℃保存备用。 1.2 病例选择及标本留取 选取2013年11月1日～2014年2月1日期间已确诊为生殖道Uu感染，并尚未用抗菌药治疗的女性患者共98例。标本由本院妇科医生用无菌棉拭子去除阴道多余分泌物，再用无菌棉拭子伸入宫颈口1～2cm旋转并停留30s取出标本，立即接种于支原体液体培养基中，送检。 1.3 培养及药敏试验、 1.3.1 Uu培养 参考Robertson JA研究中的方法[12]，Uu经过三次传代培养，菌液调整为8×104CCU/mL作为工作菌液。 1.3.2 中药MIC的确定 先将液体培养基、工作菌液、中药制剂96孔细胞培养板置于37℃恒温箱中预热2h。参考Kenny等[13]的研究方法，稍加修改，连续倍比稀释中药。（1）在96孔（8×12）无菌细胞培养板中第1孔加入液体培养基75μL，第12孔加入100μL，第3～11孔加25μL；（2）第2、3孔各加25μL中药制剂；（3）从第3孔开始，用微量移液器反复吹打混匀，吸出25μL至下一孔，用微量移液器反复吹打混匀，依次类推，直至第1l孔，混匀后吸出25μL弃去；（4）第2～11孔加培养基50μL；（5）第1～11孔加入工作菌液25μL，即第1孔为菌液对照，第12孔为阴性对照，至此，所有孔内液体最终体积为100μL。从3～11孔的中药浓度依次为250、125、62.5、31.25、15.63、7.81、3.90、1.95、0.97、0.48mg/mL，共10个稀释度。（6）加样完毕后，每孔滴加2滴无菌石蜡油，合盖置37℃恒温孵育箱培养24h，观察结果。当菌液对照由黄色变为红色即阳性，阴性对照为阴性时，判读结果，以不出现颜色变化的最小药物浓度为该种中药对该例Uu的最小抑制浓度（MIC）。 2 结果 经分析，结果表明鱼腥草MIC范围为3.90～62.5mg/mL，莪术MIC范围为3.90～62.5mg/mL，土茯苓MIC范围为7.81～62.5mg/mL。结合MIC50及MIC90分析，本实验所选的Uu临床菌株对鱼腥草有较好的敏感性，莪术次之，土茯苓居第3位。具体结果见表1。 表1 中药对UU临床菌株体外抑制试验MIC（mg/mL） 中药范围MIC50MIC90 鱼腥草3.90～62.515.6362.5 莪术3.90～62.531.2562.5 土茯苓7.81～62.531.2562.5 3 讨论 目前治疗泌尿生殖道Uu感染仍主要依靠喹诺酮类或大环内酯类抗菌药如环丙沙星、红霉素治疗，但随着广谱抗菌药的[第一论文 网(. ) 专业提供论文写作和写作论文的服务,欢迎光临]普及，以及使用不当等原因，耐药的Uu菌株愈来愈常见，Uu对喹诺酮类抗菌药的耐药现象可高达60%[14]。以中药治疗泌尿生殖道Uu感染，具有毒副作用较少的优点，临床试验及治疗也获得了较满意效果。 中药对支原体的MIC目前国内尚无统一标准，参照同类实验[15]，MIC≤7.81g/L为敏感，MIC介于7.81～250g/L为中度敏感，MIC＞250g/L为不敏感。本实验结果显示Uu临床菌株对三种中药在体外均有较好的敏感性，以鱼腥草效果最显著。三种中药均具有清热解毒、健脾护肝、抗炎抗菌作用[8-9]。莪术在体内具有的抗肿瘤、抗炎的作用，且其在体内的抗Uu作用也被证实为有效[3]，本实验莪术的抗Uu体外抑制试验结果，从另一侧面为莪术的抗Uu疗效提供又一佐证。鱼腥草和土茯苓能增强白细胞的吞噬作用，从而增强机体免疫功能，已用于治疗呼吸道病毒与细菌感染的疾病[16]。其缓解炎症引起的水肿、疼痛效果也颇为显著[17]。本实验结果显示鱼腥草及土茯苓在体外试验中均具有较好的抗Uu作用，值得进一步研究。 中药的化学成分复杂，关于其中内含的化合物及其成分作用的研究仍然较少。中药治疗虽具有毒副作用小的优点，但鱼腥草注射液引起个体过敏反应的报道并不少见，可见中药成分的药理作用及抑制Uu的机制仍有待考究，其体内外作用结果也有所差别。本实验旨在初步探讨莪术、鱼腥草及土茯苓对Uu临床菌株的体外抑制作用，但尚未研究对Uu的14种不同血清型标准菌株进行体外抑制试验，以及对Uu临床菌株进行血清型分组。另外，本实验的样本量还存在偏少的不足。尽管如此，本次实验初步证明了三种中药体外抗Uu的有效性，为进一步研究中药抗Uu作用提供参考及方向。 [参考文献] [1] 朱琴芳，石冬敏.女性不孕症患者解脲脲原体感染调查及药敏分析[J].中国血液流变学杂志，2008，8（1）：153-165. [2] 周晓莉，肖晓菲.盆炎降支颗粒剂联合阿奇霉素治疗女性生殖道解脲支原体感染脾虚湿蕴化热型40例[J].药物与临床，2010，17（19）：76-78. [3] 岳源，武双婵.莪术油治疗解脲支原体感染的作用研究[J].中国中医药，2010，8（13）：201. [4] 朱善岚，黄品芳，王友芳.莪术的药理作用研究进展[J].海峡药学，2007，19：9-11. [5] 徐立春，边可君，刘志敏，等.天然药物莪术醇抑制肿瘤细胞生长及RNA合成影响的初步研究[J].肿瘤，2005，25：570-572. [6] 陈婧，方建国，吴方建.鱼腥草抗炎药理作用机制的研究进展[J].中草药，2014，45（2）：284-288. [7] 张美玉，李贻奎，闫位娟，等.鱼腥草注射液新制剂抗炎解热作用及其机制研究[J].中国新药杂志，2010，19（9）：775-779. [8] 张薇，卢芳国.鱼腥草中挥发油的提取分析及其抗菌抗病毒作用的研究[J].实用预防医学，2008，15（2）：312-316. [9] 殷网虎，袁武军，曹美琳.土茯苓配方颗粒对临床常见致病菌的抗菌研究[J].中国中医急症，2011，20（12）：1957-1958. [10] 王建平，张海燕，傅旭春.土茯苓的化学成分和药理作用研究进展[J].海峡药学，2013，25：42-44. [11] 邱光清，许连好，林洁娜，等.土茯苓皂苷的抗肿瘤作用研究[J].中药药理与临床，2001，17（5）：14-15. [12] Robertson JA，Stemke ed serotyping scheme for Ureaplasma urealyticum strains isolated from humans[J].J Clin Microbiol，1982，15（5）：873-878.
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