【摘要】 目的 建立长春花中文多灵的含量分析方法，比较不同来源长春花药材中文多灵的含量。方法 采用高效液相色谱法，以依利特c18柱为分析柱，甲醇∶水(体积比64∶36，以二乙胺和磷酸调ph11)为流动相，流速为1 ml/min;220 nm为检测波长。 结果 红色长春花、白色长春花以及恩平、阳江、广州紫色长春花样品中文多灵含量分别是1.561、0.390、0.982、0.622、0.587 mg/g。结论 不同来源的长春花中文多灵的含量差异较大。
【关键词】 高效液相色谱法;长春花;文多灵
abstract:objective to establish the determination method of vindoline extracted from madagascar periwinkle (catharanthus roseus (l.) don.) and to compare vindoline content in different sources of periwinkle. methods eluted at a yilite c18 column with methanolwater (64∶36) ( adjusted to ph 11 with diethylamine) at flow rate of 1 ml/min,and detected at 220nm,a hplc method was developed for the determination of vindoline in periwinkle;results the vindoline content in red periwinkle，white periwinkle in guangzhou and pink periwinkle from enping,yangjiang,and guangzhou were 1.561,0.390,0.982,0.622,0.587 milligrammes per sion the contents of vindoline varied greatly among periwinkles from different sources.
key words:hplc;catharanthus roseus (l.) don.;vindoline
长春花(catharanthus roseus (l.) don.)为夹竹桃科长春花属植物，原产于非洲马达加斯加岛西印度一带的热带森林地区，早在宋代以前就传入我国[1]。全株入药，有利尿止血、镇定安神、平肝降压等功效[2]，常用来治疗疟疾、腹泻、糖尿病、高血压、皮肤病及何杰金氏病[3]。长春花含有100多种吲哚生物碱[4]，其中主要成分长春碱临床上广泛用于治疗急性白血病、何杰金氏病、恶性淋巴肉瘤、绒毛膜上皮癌等[5]。文多灵生物碱为长春花植物体内合成长春碱的前体[6]。长春花分布于全国各地，在广东亦有大量栽培，而且种类繁多，但广东省不同来源长春花药材中文多灵的含量情况却未见有文献报道。本文采用高效液相色谱法对5批不同来源的长春花中文多灵的含量进行了测定。
1 仪器与试药
天美lc 2000高效液相色谱仪，包括lc2030紫外检测器，lc2130 pump，t2000p色谱工作站。
文多灵对照品购于天津中新药业，纯度为99.5%,符合hplc定量分析的要求;分析用长春花样品采自广州或广东其他地区，经本校药用植物教研室曾令杰副教授鉴定为长春花(catharanthus roseus (l.) don.)，白花长春花(catharanthus roseus var. albus g. don,vinca rosea var. alba sweet);甲醇为色谱纯，水为双蒸水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件及系统适应性考察
色谱柱：yilite c18柱(10 μm,4.6 mm×250 mm);流动相：甲醇水(体积比64∶36，以二乙胺和磷酸调ph11);流速：1 ml/min;进样量：20 μl;检测波长：220 nm。在该色谱条件下，文多灵的保留时间为13.591 min。见图1
2.2 对照品的制备
精密称取文多灵0.010 80 g置25 ml量瓶中，用甲醇溶解并定容至25 ml，摇匀，即得质量浓度为0.432 0 mg/ml的对照品贮备液，置冰箱中保存，备用。
2.3 样品溶液的制备
精密称取干燥药材粉末各2 g，以氨水浸润加三氯甲烷70 ml在室温下超声提取30 min，滤过，精密量取续滤液50 ml，蒸干，用甲醇溶解并完全转移至10 ml的量瓶中，甲醇定容，即得。
2.4 线性关系考察
分别精密吸取“2.2”项下对照品贮备液1、2、3、4、5 ml置10 ml量瓶中，用甲醇定容，摇匀，配成浓度分别为0.043 2，0.086 4，0.129 6，0.172 8，0.216 0 mg/ml的对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，以文多灵质量浓度为横坐标，测得峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程为
y=24416182.870x+218182(r2=0.999，n=5)
结果表明，文多灵检质量度在0.043 2～0.216 0 mg/ml范围内与峰面积积分值线性关系良好。
2.5 精密度试验
分别精密吸取“2.2”项下对照品贮备液20 μl,按“2.1”项下色谱条件重复进样5次，结果，峰面积积分值的rsd=1.79%，符合hplc定量分析要求。
2.6 加样回收率试验
取同一批长春花样品6份，每份约1 g，分别精密加入对照品溶液适量，按“2.3”项下提取制备供试品溶液，并按“2.1”项下色谱条件进行含量测定，计算回收率。结果表明文多灵的平均回收率为97.2%，rsd=1.68%，见表1。表1 文多灵回收率试验结果
2.7 样品的测定
分别精密吸取“2.3”项下样品溶液20 μl,按“2.1”项下色谱条件测定。结果见表2。结果表明：不同来源的长春花中文多灵含量差异较大，红色长春花中的含量最高，紫色长春花中的含量次之，白色长春花中的含量最少;阳江产与恩平产的紫色长春花中文多灵含量也有差异。表2 不同来源长春花文多灵生物碱的含量
3 讨 论
3.1 本文先后采用甲醇水(以二乙胺和磷酸调ph11)体积比为60∶40，62∶38，64∶36，65∶35的流动相进行分离，结果以体积比为64∶36时，文多灵得到了较好的分离，峰形良好，回收率稳定，并且其他成分对文多灵的检测不形成干扰，说明建立的分析方法可行。
3.2 研究结果表明，不同来源的长春花中文多灵含量有较大的差异，红色长春花中文多灵的含量最高，紫色长春花次之，白色长春花含量最少。不同产地的长春花文多灵含量差异也较大，在所检测的紫色长春花中，恩平所产的文多灵含量最高，阳江的次之，广州的最低。表明遗传因素和环境条件都影响着长春花中文多灵的含量水平。
3.3 本文首次对不同来源的长春花药材中文多灵的含量进行了探讨，为长春花品种的筛选和培育提供了科学的依据，为中药材长春花的规范化栽培奠定了基础。
【参考文献】
[1] 张琳，杨磊，牛卉颖，等.大孔树脂吸附分离长春花中的文多灵、长春质碱和长春碱[j].化工学报,2008，59(3):607-614.
[2] 张向飞，张荣涛，王宁宁，等.真菌诱导子对长春花愈伤组织中吲哚生物碱积累的影响[j].中草药，2004(2):201-204.
[3] 祖元刚，罗猛，牟瑶松，等.长春花生物碱成分及其药理作用研究进展[j].天然产物研究与开发，2006(2):325-329.
[4] 杨蕾，唐中华，祖元刚.高效液相色谱法同时测定长春花中的文多灵、长春质碱和脱水长春碱[j]. 色谱,2007,25(4):550-552.
[5] 闫家福，仝燕，王锦玉，等.不同产地长春花中3种生物碱的含量测定[j]. 中国中药杂志,2007,32(16):1717-1718.
[6] 罗猛,付玉杰,祖元刚,等.反相高效液相色谱法快速测定长春花中4种生物碱[j]. 分析化学,2005,33(1):87.
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