正交实验法优选复方降脂灵的提取工艺

作者：陈红红， 郭姣， 唐春萍， 郭彤， 何伟

【摘要】 　　目的优选中药复方降脂灵的提取工艺。方法采用正交实验法，以出膏率和提取液中齐墩果酸的含量为指标进行优选。结果复方降脂灵的最佳提取工艺为加水12倍量，提取3次，2 h/次。结论对于出膏率，提取次数有显著性影响；对于齐墩果酸，提取次数、加水量和提取时间3个因素均无显著性影响。

【关键词】 复方降脂灵 正交实验 提取工艺 齐墩果酸 出膏率

复方降脂灵(原名丹七降脂汤)为广东药学院郭姣教授临床经验方，主要由女贞子、白术、杜仲等8味中药组成，临床上在降血脂、降血糖和改善血流变等方面均有良好的作用。其汤剂和粉末胶囊经临床、初步药效学研究，均证实疗效确切而无明显毒副作用［1］。女贞子是本复方中的君药，而齐墩果酸是女贞子的主要药效成分之一。齐墩果酸除了能用于 治疗 急性黄疸型肝炎、慢性迁延型与活动型肝炎和抗癌辅佐药物外，还具有降糖、降血脂、抗炎、抗病毒、抗衰老及增强免疫的作用［2］。通过水提取、90％乙醇提取、70％乙醇提取、半仿生提取和综合提取等不同提取工艺的药 理学 实验，结果表明以水提取法的药效为最好［3］。水提取法工艺简单、成本低，而且药效好。为了研究水提取工艺的最佳条件，用正交实验法，以出膏率和齐墩果酸含量为考察指标，对水提取工艺条件进行优选，为生产提供依据。

　 　1 材料与仪器

　　1.1 材料女贞子、杜仲、大蓟、白术、田七等中药均购自广东省药材公司，经广东药学院生药学专家刘基柱老师鉴定为真品。

　　1.2 仪器与试剂t6紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）；hh-6 电子 恒温水浴锅（苏州威尔实验用品有限公司）；gzx-9420 mbe 电热恒温鼓风干燥箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）。齐墩果酸对照品由 中国 药品生物制品检定所提供；香草醛（指示剂，天津市福晨化学试剂厂）；薄层层析硅胶h（层析用，青岛海洋化工厂）和羧甲基纤维素纳盐（cmc-na）800－1200为化学纯；其它试剂均为分析纯。

齐墩果酸对照品使用液：精密称定齐墩果酸对照品10 mg，用三氯甲烷配制成浓度为0.2 mg/ml的溶液。

硅胶板的制备：称取硅胶h 5 g，放入研钵中，加入1％cmc-na溶液适量，调成糊状，均匀涂布于洁净的玻璃板(20 cm×4 cm)上，使其表面均匀光滑。于室温下晾干后，置于烘箱内加热活化，在温度105℃左右保持活化30 min，然后放入干燥箱中保存，备用。

　 　2 方法

　　2.1 工艺设计

　　采用加热回流的提取方法，提取时选择了加水量、提取时间及提取次数3个因素，每个因素选取三个水平设计了正交实验方案，实验因素水平见表1。根据以上因素水平,选择l9(3)4正交设计表，按照正交实验表项下的实验条件进行提取，用出膏率及齐墩果酸的含量作为考察指标，对水提工艺条件进行优选。

　　2.2 样品溶液的制备药材经60℃恒温烘30 min，稍加捣碎，称取处方药材共64 g。按正交实验表项下设计的实验条件以加热回流方式进行提取，合并水提取液。将上述提取液浓缩，定容至一定体积，制得样品溶液。表1 提取实验水平因素（略）
　
　　2.3 出膏率测定精密量取一定体积样品溶液，置于已干燥恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸发至近干，再放置烘箱于105℃烘3～4 h，置干燥器中冷却至室温，精密称量质量，按下式 计算 出膏率。
　
　　出膏率（%）=w’w×vv’×100%

w′(g)为浸膏质量，w(g)为药材质量，v为样品溶液总体积，v′为量取样品溶液的体积。

　　2.4 齐墩果酸的含量测定

　　2.4.1 标准曲线的制备采用高氯酸－香草醛比色法测定齐墩果酸的含量［4］。精密量取齐墩果酸对照品使用液（0.2 mg/ml的三氯甲烷溶液）0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6 ml（0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2 mg），分别置于刻度离心管中，水浴挥干溶剂，各精密加入5％香草醛乙酸溶液0.2 ml，高氯酸0.8 ml，混匀，置于70℃恒温水浴上加热15 min，冷却至室温，精密加入醋酸乙酯4 ml，摇匀。以试剂为空白，在555 nm处测定吸光度值，结果见表2。并以吸光度a对对照品使用液体积v进行直线回归，得回归方程a＝0.942 5v＋0.005 2，r=0.997 8。表2 标准曲线测定数据（略）
　
　　2.4.2 样品测定精密量取一定体积的样品溶液，浓缩成稠膏，干燥，称量质量。精密称取上述膏体10 g 于圆底烧瓶中，加入三氯甲烷30 ml，70℃恒温水浴回流1 h。用分液漏斗分出三氯甲烷层，于残渣中再加入三氯甲烷30 ml，同样回流提取1 h，合并三氯甲烷溶液，无水na2so4干燥，过滤，挥干溶剂，再用三氯甲烷定容至5.00 ml，备用。

用精密吸取样品溶液5 μl，对照品溶液30 μl点于同一硅胶板上，用三氯甲烷－甲醇－冰乙酸［5］（40∶1∶1）展开10 cm，取出，挥干溶剂，再放入饱和碘蒸气缸中显色，定位后再挥去碘，将斑点分别刮入具塞刻度离心管中，各加入5％香草醛乙酸溶液0.2 ml，高氯酸0.8 ml，混匀，同“2.4.1”标准曲线的制备项下操作。离心后取上清液于555 nm处测定吸光度，同时做空白实验（在硅胶板上刮取与样品斑点同样大小的空白硅胶进行实验）。根据吸光度a，由回归方程 计算 出齐墩果酸的含量。

　 　3 结果

出膏率正交实验结果见表3。由表3可知，c因素的极差很小，因此把c因素与空白项合并，作为误差项，方差分析结果见表4。齐墩果酸含量测定正交实验结果见表5，方差分析结果见表6。表3 出膏率l9(3)4正交实验（略）

　　由表3可见， ra＞rb＞rc ，表明对出膏率的影响程度依次为a＞b＞c，即提取次数是主要因素，其次是加水量，提取时间的影响最小。a因素中a3＞a2＞a1，b因素b3>b2>b1，c因素c3≈c2>c1，从节约的角度，选择c2。从表4可见，提取次数对出膏率有显著影响，加水量和提取时间无显著性影响。因此，以出膏率为指标，优选出复方降脂灵水提取工艺的最佳条件为a3b3c2。表4 出膏率方差分析（略）
　
从表5可见，优先顺序为a＞c＞b，即提取次数是主要因素，其次是提取时间，加水量的影响最小。a因素中a3＞a2＞a1，b因素b3>b1>b2，c因素c2>c3>c1。由表6可见，提取次数，加水量和提取时间3个因素对齐墩果酸的含量均无显著性影响。因此，以齐墩果酸含量为指标，优选出复方降脂灵水提取工艺的最佳条件为a3b3c2。表5 齐墩果酸l9(3)4正交实验（略）表6 齐墩果酸方差分析（略）
　
正交实验结果表明，综合出膏率和齐墩果酸含量指标，最佳提取工艺为a3b3c2，即加水量为药材量的12倍，提取时间2h及提取3次，出膏率及所得齐墩果酸的含量最高。对于出膏率，提取次数有显著性影响，加水量和提取时间无显著性影响；对于齐墩果酸，提取次数、加水量和提取时间3个因素的影响均无显著性差异。

【 参考 文献 】
　　［1］唐春萍,郭 姣,陈红红,等.调脂灵对高脂血症大鼠降脂作用的实验研究［j］.