【摘要】：建立了聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)-激光烧蚀进样电感耦合等离子体质谱(LA-ICP-MS)与非特异性同位素稀释法联用技术,通过测定蛋白条带上硫元素的含量,实现了人血清中蛋白的定量分析.血清电泳分离条件为:分离胶浓度(质量分数)为7.5%,浓缩胶浓度为4%,电泳电压100 V.为优化激光烧蚀实验条件,以LA-ICP-MS测得不同浓度硫富集凝胶中32S的信号强度,在1~400μg/g范围内呈现良好的线性关系,R2=0.993.采用外标法对血清中的转铁蛋白和白蛋白进行了相对定量分析.此外,重点采用"电泳后同位素稀释"方法实现了蛋白条带上34S稀释剂的加入,对血清中转铁蛋白和白蛋白进行了绝对定量分析;采用人血清蛋白标准物质ERM-DA470/IFCC对建立的方法体系进行了验证,结果表明2种蛋白的定量结果与标准值吻合,方法的准确性好,且测量精度优于外标法.
【关键词】： 非特异性同位素稀释 激光烧蚀 电感耦合等离子体质谱 转铁蛋白 白蛋白
【基金】：国家质检总局公益性行业科研专项(批准号:201110008) 中国计量科学研究院基本科研业务费(批准号:AKY1403-14) 科技部基础性专项(批准号:2011FY130100)资助~~
【正文快照】：
自1975年O’Farrell等[1]采用凝胶电泳分离蛋白质混合物以来,蛋白质组学研究已经从简单的蛋白质定性发展到精确的蛋白质定量(即定量蛋白质组学)[2~4].传统的蛋白质定量方法采用凝胶电泳对样品进行分离和染色,选取凝胶上蛋白质点经酶解后,用电喷雾电离质谱(ESI-MS)或基质辅助激
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