竹节参多糖抗脑衰老作用的实验研究

作者：杨辉 程清洲 许彬 陈平 彭超华

【摘要】 目的研究竹节参多糖的抗氧化和延缓衰老作用。方法颈背部皮下注射d-半乳糖建立小鼠衰老模型，用自制的竹节参多糖分为低、中、高剂量的灌胃药物组,并用生理盐水灌胃作正常对照组，香菇菌多糖作阳性对照组, 连续用药60 d。结果中、高剂量竹节参多糖能明显提高脑组织中过氧化氢酶(cat)的活性 (p<0.01)、降低丙二醛(mda)含量 (p<0.01)，同时能明显提高血液中超氧化物歧化酶(sod)的活性。结论竹节参多糖具有较好的消除自由基、延缓脑衰老的作用。

【关键词】 竹节参多糖; 抗衰老; 过氧化氢酶; 丙二醛; 超氧化物歧化酶

许多研究表明，自由基损伤与衰老密切相关。人参多糖、香菇多糖等许多中草药提取物能直接清除自由基，提高sod、cat等抗氧化酶的活性及降低mda含量，发挥抗衰老作用[1,2]。竹节参为五加科人参属植物竹节参panax-japonicus 的根茎，是我国西南地区土家族、苗族集聚地区民间常用的中草药。性味甘苦、温，具有活血化淤、消肿止痛、止咳化痰、滋补强壮等功效。本课题组前期已报道竹节参中的粗多糖成分具有抗疲劳作用和提高机体免疫能力[3]，本实验旨在通过测定竹节参多糖提取物对小鼠脑组织cat的活性及mda的含量以及血液中超氧化物歧化酶sod的活性来研究鄂产竹节参多糖对小鼠抗脑衰老的作用。

　 　1 材料与方法

　　1.1 主要试剂及仪器d-半乳糖( 中国 上海惠兴生化试剂有限公司);wfz-uv2000紫外可见分光光度计(尤尼科上海仪器有限公司，h0511012);丙二醛试剂盒、超氧化物歧化酶试剂盒、过氧化氢酶试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号20080801，20080829，20071129);测定参照南京建成生物工程公司sod，cat，mda试剂盒说明书方法测定;香菇菌多糖片(武汉迪奥药业有限公司，批号20070801)。

　　1.2 竹节参多糖提取物的制备武汉 工业 学院药物研发中心研制，竹节参药材采自于湖北省恩施州湖北省中药材研究所竹节参种植基地，经武汉工业学院陈平教授鉴定为五加科人参属植物竹节参的根茎，竹节参的根茎采用水提醇沉法制得样品，样品采用硫酸苯酚法测定，其含量达99.5%[3]，冷冻干燥保存。实验前以纯水为溶剂配制不同浓度样品，4℃低温保存，备用。

　　1.3 实验动物分组及处理华中科技大学同济医学院实验动物中心提供的昆明种系实验小鼠60只(鄂医动管证字：19-052。)，体重27～30 g，随机分为6组，每组雌雄各5只，分笼饲喂。第1组：空白组，灌胃0.9%nacl灭菌溶液，1次/d;第2组：模型组，颈背部皮下注射d-半乳糖灭菌溶液120 mg·kg-1体重和灌胃等体积生理盐水，1次/d[4，5];第3组：阳性对照组，颈背部皮下注射腹d-半乳糖 120 mg·kg-1体重和灌胃等体积香菇菌多糖溶液100 mg·kg-1体重，1次/d。第4、5、6组分别为药物低、中、高剂量组：根据预试验确定小鼠的每日用量，分别为50，120，200 mg·kg-1体重灌胃，并颈背部皮下注射d-半乳糖 120 mg·kg-1体重，1次/d。所有试验动物均食用全价混合饲料，自由摄食和取水，连续60 d。

　　1.4 小鼠脑组织中cat活性、mda含量及血液sod活性的测定末次给药24 h后，眼眶取血，拔眼球采血(肝素钠抗凝)，冷冻静置2～4℃，取其血浆，按试剂盒说明书分别测定血浆中sod活性;将小鼠断头取脑，从头端至尾端称取同等重量的组织，加预冷的生理盐水进行匀浆制备成10%的组织匀浆。冷冻离心(2～4℃)，取其上清液，用cat试剂盒测定过cat活力;用mda试剂盒测定mda的含量。

　　1.5 统计学处理实验中各项数据均采用±s表示。实验所得数据用spss13.0统计软件进行分析，空白组、阳性对照组、各剂量组与模型组之间的均数比较采用方差分析。

　 　2 结果

　　结果见表1，与生理盐水空白组相比，模型组小鼠血液sod、cat活性明显降低及mda含量明显升高，在统计意义上有明显的区别(p<0.01)，阳性对照组与模型组相比，小鼠血液sod，脑组织cat活性明显升高及mda含量明显降低，在统计意义上有明显的区别(p值均为p<0.05)，说明本实验中阳性对照组具有对照作用。竹节参多糖各剂量组与模型组相比，中、高剂量给药组小鼠脑cat活性明显升高(p<0.01)及mda含量明显降低(p<0.01);同时中剂量给药组血液中sod活性明显升高(p<0.01)。以上结果表明：竹节参多糖具有升高脑cat活性及降低mda含量的作用，以中、高剂量最为适宜。表1 小鼠脑组织的cat活力、mda含量及血液sod活力

　 　3 讨论

　　自由基理论在机体衰老中的作用目前已受到人们的高度重视。自由基(free radica1)又称游离基，是指在最外层轨道中含有未配对 电子 的原子、原子团或特殊状态的分子，也就是具有未配对的原子、原子团、分子或离子叫自由基。其化学性质活泼，有极强的氧化反应能力，可使各种生物膜的不饱和脂肪酸发生过氧化，形成过氧化脂质[6]，这些产物具有毒性，能使蛋白质分子内和分子间发生交联，发生去氢、加成、裂解等反应，从而引起dna的双螺旋交联出现错误或无法分裂，一些酶的活性改变，影响细胞的代谢。d-半乳糖是机体的正常营养成分，当半乳糖过多时，可由半乳糖氧化酶催化生成醛糖和过氧化氢，产生超氧阴离子自由基。过量的氧自由基可引起神经元细胞的损伤，使脑内总rna和蛋白质含量下降，脑内神经元密度降低，造成动物学习记忆能力下降及机体的衰老[7]。许多中草药是强有力的抗氧化剂，适当补充外源性抗氧化物质，可提高机体抗氧化系统的活力，降低过氧化质子含量，从而起到抗衰老作用。竹节参多糖为竹节参的根茎采用水提醇沉法制得的提取物, 本实验结果表明：竹节参多糖具有提高脑组织cat活性及降低mda含量的作用，以中、高剂量较为适宜;同时能提高血液中sod活性，以中剂量较为适宜。提示竹节参除能够提高小鼠脑组织cat活性和血液中sod活性,阻断自由基连锁反应，提高脑抗活性氧损伤的能力，发挥抗衰老作用外，另一可能原因是竹节参多糖成分能够降低脑组织mda含量直接清除自由基作用。

【 参考 文献 】
　　[1] 黄娅琳.抗衰老中药的研究[j].时珍国医国药，2007，18(3)：691.
　　[2] 曲敬波，齐建祥，崔传芳,等.甘草对老年大鼠sod、cat、gsh-px、lpo影响的实验研究[j].