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lncRNA XIST在肝细胞癌中的表达及功能研究

作者2019-03-27 10:00未知
目的首先,分析长链非编码RNA X染色体失活特异转录本(long non-coding RNA X inactive specific transcript,lnc RNA XIST,lnc RNA XIST)在肝癌组织及肝癌细胞系中的表达及其与临床病理特征的关系。其次,研究lnc RNA XIST与肝癌细胞增殖、迁移及侵袭的关系。最后,分析lnc RNA XIST在肝癌中起作用的可能分子机制,为阐明肝癌发生发展机制研究提供新的理论基础。方法收集29例肝细胞癌病患的癌组织及其癌旁组织,应用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)技术检测各组织中lnc RNA XIST的表达水平。并应用统计学方法对lnc RNA XIST表达水平与肝癌病人临床病理特征进行分析。同样应用q RT-PCR技术检测五种不同肝细胞系中lnc RNA XIST的表达水平。使用RNA干扰技术降低肝癌细胞系中lnc RNA XIST表达水平,并在此基础上研究细胞的体外增殖、迁移及侵袭能力的变化。通过生物信息数据库分析与lnc RNA XIST关系密切的分子,并应用q RT-PCR技术进行验证。结果在29对肝癌及癌旁正常组织中,有22例病人癌组织lnc RNA XIST水平高于癌旁组织(22/29,75.86%),癌组织与癌旁组织的表达差异有统计学显著性(P0.001),其中16例癌组织lnc RNA XIST表达高于癌旁正常组织1.5倍以上(16/29,55.17%)。lnc RNA XIST表达升高与肝癌分化程度相关(P=0.008),与性别、年龄、乙型肝炎病毒、肝硬化、甲胎蛋白、肿瘤大小、包膜浸润、门静脉癌栓均无关(P0.05)。相对于人正常肝细胞系L-02,肝癌细胞系Hep G2、Hep3B、SNU449、SNU398的lnc RNA XIST表达水平升高,且差异具有统计学显著性(P0.001)。应用RNA干扰技术降低SNU449细胞中lnc RNA XIST的表达水平(P0.05)通过体外细胞增殖、侵袭及迁移实验发现,与对照组相比,降低lnc RNA XIST表达水平,显著抑制了细胞增殖、侵袭及迁移。应用数据库Target Scan(http://www.targetscan.org)、Starbase(http://starbase.sysu.edu.cn/)对lnc RNA XIST调控靶点进行预测,我们发现mi R-200b-3p与lnc RNA XIST关系最为密切,其与lnc RNA XIST有3个位点配对结合,在数据库中发现多个癌种均表现出了两者之间的密切联系。mi R-200b-3p在Hep G2、Hep3B、SNU449、SNU398各肝癌细胞系中均低于人正常细胞株(P0.05)。随后采用q RT-PCR的方法对mi R-200b-3p的表达水平进行检测,结果发现,各肝癌细胞系中mi R-200b-3p的表达水平均显著低于正常肝细胞中的表达水平,抑制肝癌细胞中lnc RNA XIST表达能显著上调mi R-200b-3p的表达水平(P0.05)。结论lnc RNA XIST表达水平在肝癌组织及肝癌细胞系中表达显著升高,其高表达与肝癌分化程度有关。降低lnc RNA XIST表达水平能显著抑制肝癌细胞增殖、侵袭及迁移。抑制靶点mi R-200b-3p表达可能是lnc RNA XIST促进肝癌发生发展的一种分子机制。

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