Hi:欢迎来到中国论文网     

所有论文科目分类


中国论文网 > 硕博论文 > 刺参GPR54-Like筛选克隆及特征研究

刺参GPR54-Like筛选克隆及特征研究

作者2019-03-27 09:35未知
刺参(Apostichopus japonicus)属于棘皮动物门(Echinodermata)、海参纲(Holothuroidea)、刺参科(Stichopodidae)、仿刺参属(Apostichopus),属后口动物,在无脊椎动物中具有较高的进化地位。由于刺参具有较为独特的生理现象,如再生、夏眠、吐肠、自溶等等,其相关基础研究得到了海洋生物学家的关注并获得了快速发展。GPR54(G protein coupled receptor 54)是神经肽Kisspeptin的内源性受体,在动物的生殖发育过程中发挥重要作用。本研究利用分子克隆、生物信息学分析、表达载体构建、体外表达等技术手段,开展刺参GPR54-like(AjGPR54L)基因克隆及序列特征分析,通过GFP荧光蛋白融合表达AjGPR54L的亚细胞定位及其在不同组织的转录表达差异研究,初步探讨AjGPR54L受体结构与功能特征,为深入揭示GPR54受体在刺参中的功能活性及调控机制奠定基础。主要获得以下研究结果:利用公开发布的刺参转录组数据库,经过合并拼接及处理,共计获得91,824条Unigenes,平均长度702 bp,N50为1135 bp,18,955条Unigene获得注释信息,通过刺参转录组数据的筛选分析,共获得GPCRs(G protein coupled receptor,GPCR)预测序列988条,根据其注释基因信息,获得GPR54基因名注释的序列片段。基于刺参GPR54-Like基因核心片段设计引物,采用5,和3,cDNA末端快速扩增技术(rapid amplication of cDNA ends,RACE)技术获得AjGPR54L的全长序列,并对其序列特征进行生物信息学分析,结果表明,AjGPR54L(MG199220)序列全长为1454 bp,其中包含编码330个氨基酸的993 bp开放阅读框(open reading frame,ORF),191 bp的5'非翻译区(untranslated region,UTR)以及270 bp的3'UTR。预测蛋白质的分子量(Mw)为37.83 kDa、等电点(pI)为9.81。通过预测发现AjGPR54L的氨基酸序列包含:1个N-连接糖基化位点,5个ASN-XAA-Ser/Thr序列,1个细胞外的N端结构域(N9),34个磷酸化位点和5个酪氨酸位点,具有典型的七次跨膜结构,有三个胞外环(EC)和三个胞内环(IC)。通过对AjGPR54L受体性质及定位进行分析,发现获得的AjGPR54L主要定位在细胞膜上。将构建的AjGPR54L-EGFP的融合表达质粒瞬时转染至HEK293细胞,经激光共聚焦扫描显微镜显示,细胞膜上观察到明显的绿色荧光信号;表明HEK293细胞中表达的Aj GPR54L受体蛋白定位于细胞膜,AjGPR54L-EGFP蛋白中C-末端EGFP(enhanced green fluorescence protein,EGFP)标记不影响AjGPR54L表达和到膜。此外,对AjGPR54L表达的组织差异性进行分析,运用实时荧光定量PCR方法检测成年刺参AjGPR54L基因在刺参呼吸树、消化道、体壁、肌肉、神经环、雌性性腺中的定量表达,结果表明:AjGPR54L在刺参不同组织中均有表达且表达量存在差异,在神经环中表达量显著高于其他组织;在呼吸树、消化道、体壁、肌肉及雌性性腺中表达量差异不显著。本研究结果初步揭示了刺参GPR54L编码基因及蛋白的特征,阐明了AjGPR54L分布及表达特征,并为进一步探索此受体的信号通路及调控机制奠定了基础。

最新更新

热门推荐

[硕士论文]MPACC硕士论文重复率要求是
MPACC硕士论文 重复率要求是多少及方法?每个学校对自己的论文重复率要求可能会有所不同,但是大致也不会超过哪个范围,本篇文章就为大家介绍一下MPACC硕士论文重复率要求是多少?大家可以大致的参考一下,具体情况还请参考自己学院的详细要求哦。 MPACC硕士论文重复率要求 一般而言,大部分院校针对硕士研究生研究生论文重复率都规定在20%以内,当然,也有部分院校规定...[全文]
[硕士论文]MPACC硕士论文答辩详细流程
论文答辩都有一套详细的流程要走,具体哪个步骤做什么,都会有详细的要求介绍,下面我们就为大家详细介绍一下MPACC硕士论文答辩的详细步骤,具体哪一步做什么,都给大家粗略的介绍一下。 一、 MPACC硕士论文 答辩的详细步骤 二、自我介绍想必关于自我介绍大家都知道, 而在论文答辩的过程中, 自我介绍的时候,需要举止大方、态度从容、面带微笑,礼貌得体的介绍自己...[全文]
[硕士论文]教育硕士毕业论文开题报
教育硕士研究生开题报告可能很容易忽视,可能内心想着就是那几个方面,不需要一直提,其实有很多细节你可能不知道,现在58 博学论文 网小编主要包括以下几个方面: (一)教育硕士论文名称 论文名称就是课题的名字 第一,名称要准确、规范。准确就是论文的名称要把论文研究的问题是什么,研究的对象是什么交待清楚,论文的名称一定要和研究的内容相一致,不能太大...[全文]
[硕士论文]企业管理研究生论文创新
企业发展过程中的重要途径和方式就是企业管理,结合市场发展以及企业的实际情况进行调整才是企业管理的重要需求。传统的管理方式已经无法满足企业发展的需求,因此电力企业创新管理体系构建十分必要,利用现有的资源,实现科学发展,制定企业发展的具体目标,适应环境的变化,尤其是要让企业内部实现紧密配合,提高企业的经济效益,满足更多的社会需求,管理创新可以促进企业...[全文]
[硕士论文]硕士研究生开题报告选题
很多 管理论文 的硕士研究生开题报告中,会对自己的学科领域在报告中最后做一个综合说明。述更多的并不是叙述,而是评述与述评,即要有作者自己的独特见解。要注重分析研究,善于发现问题,突出选题在当前研究中的位置、优势及突破点;要摒弃偏见,不引用与导师及本人观点相悖的观点是一个明显的错误。 1、开题报告毕业论文题目题目是硕士毕业论文中心思想的高度...[全文]
[硕士论文]硕士研究生开题报告怎么
硕士研究生开题报告 格式与开题报告技巧开题报告是研究生毕业论文工作的重要环节,是指为阐述、审核和确定毕业论文题目而做的专题书面报告,它是研究生实施毕业论文课题研究的前瞻性计划和依据,是监督和保证论文质量的重要措施,同时也是训练研究生科研能力与学术作品能力的有效的实践活动。《中国青年报》报道:复旦大学新闻学院2002级研究生所做毕业论文开题报告...[全文]
关闭窗口 论文咨询